Quali sono le apparecchiature comunemente utilizzate per la coltura cellulare?

Quali sono le apparecchiature comunemente utilizzate per la coltura cellulare?

19-09-2022

1. Banco da lavoro ultra pulito




Attualmente, la stragrande maggioranza dei laboratori cellulari utilizza banchi di lavoro ultra puliti per ottenere un funzionamento asettico, con operazioni semplici, installazione conveniente, occupazione di spazio ridotto e buon effetto di purificazione. Anhui Renhe Purification introduce due tipi principali di banchi da lavoro super puliti: il tipo a flusso laterale (tipo verticale) e il tipo a deflusso (tipo a flusso laminare orizzontale). Il principio di funzionamento è generalmente che l'aria interna viene inizialmente filtrata dal filtro grossolano, pressata nella scatola di pressione statica dal ventilatore centrifugo e quindi filtrata finemente dal filtro dell'aria ad alta efficienza. Il flusso d'aria pulita risultante attraversa l'area sterile a una certa velocità del vento in sezione uniforme, formando così un ambiente di lavoro privo di polvere e sterile con un'elevata pulizia.




(1) Piano di lavoro a flusso laterale: il flusso d'aria dopo la purificazione dell'aria scorre da sinistra o da destra al lato opposto attraverso il piano di lavoro, o dall'alto verso il basso o dal basso verso l'alto, formando una barriera al flusso d'aria per mantenere sterile l'area di lavoro. La struttura del piano di lavoro è chiusa;




(2) Piano di lavoro in uscita: l'aria purificata fluisce verso l'operatore, in modo che il flusso d'aria estranea non venga miscelato nell'operazione. La struttura del piano di lavoro è aperta, ma l'operazione sperimentale di sostanze nocive è sfavorevole all'operatore. Il piano di lavoro ultra pulito dovrebbe essere regolarmente controllato per la pulizia dai dipartimenti competenti. La pulizia del piano di lavoro ultra pulito che soddisfa i requisiti dovrebbe raggiungere il grado 100 e la dimensione delle particelle dovrebbe essere testata con un contatore di particelle di polvere ≤ 5 μ Il numero di particelle di polvere in m non deve superare 3,5/l; Il flusso d'aria deve essere controllato entro 0,75-1,0 m3/s; Il numero medio di colonie batteriche è inferiore a 1 e il filtro deve essere sostituito se necessario in base alla sterilità.




2. Microscopio




Il microscopio invertito è un'attrezzatura necessaria per il lavoro quotidiano del laboratorio di coltura cellulare, utilizzato principalmente per la comprensione quotidiana della crescita cellulare e l'osservazione della presenza di inquinamento. Se i fondi lo consentono, si consiglia di utilizzare un microscopio a contrasto di fase di alta qualità, un microscopio anatomico, un microscopio a fluorescenza, un sistema di registrazione video o un dispositivo di ripresa time-lapse dotato di un sistema fotografico per scattare foto e registrare la crescita cellulare in qualsiasi momento.




3. Incubatrice




Come le cellule in vivo, le cellule coltivate in vitro devono sopravvivere a una temperatura costante. Generalmente, la temperatura di crescita ottimale è 37 ℃ e la differenza di temperatura non deve superare ± 0,5 ℃. Quando la temperatura aumenta di 2 ℃, diventa sfavorevole per la sopravvivenza cellulare e le cellule moriranno presto quando la temperatura supera i 40 ℃. Pertanto, l'incubatrice termostatica e l'incubatrice a CO2 in grado di controllare accuratamente la temperatura sono la scelta migliore.




(1) Incubatrice a temperatura costante: deve essere selezionato un incubatore di controllo automatico della temperatura a prova di acqua o a transistor, che abbia un'elevata sensibilità e un controllo stabile della temperatura. L'incubatrice termostatica generale è più economica, ma il suo svantaggio è che è adatta solo per colture chiuse.




(2) Incubatrice a CO2: attualmente, la maggior parte delle sale per colture cellulari è stata ampiamente utilizzata. Il vantaggio dell'incubatrice a CO2 è che può fornire una certa quantità di CO2 (la concentrazione comune è del 5%) necessaria per la coltura cellulare, ed è facile stabilizzare il pH del mezzo di coltura, che è adatto per ambienti aperti o semiaperti cultura. Quando si utilizza il flacone di coltura, per mantenere l'interno del flacone di coltura ventilato con il mondo esterno, il tappo del flacone può essere leggermente allentato. Per evitare l'inquinamento cellulare, quando si utilizza questo metodo di coltura, l'aria nella scatola di coltura deve essere mantenuta pulita e deve essere regolarmente disinfettata con radiazioni ultraviolette o alcol. Allo stesso tempo, il serbatoio contenente acqua distillata sterile deve essere collocato nella scatola della coltura per evitare l'evaporazione della soluzione di coltura,




(3) Materiali di consumo per colture cellulari: per la coltura delle cellule è possibile utilizzare piatti di coltura, piastre o bottiglie.




4. Forno (forno di essiccazione)




Alcuni strumenti e recipienti utilizzati per la coltura cellulare devono essere asciugati prima dell'uso e la vetreria deve essere sterilizzata a calore secco. Durante la disinfezione a calore secco, la temperatura nel forno deve generalmente raggiungere più di 160 ℃ e di solito viene utilizzato il forno ad aria compressa. I suoi vantaggi sono la temperatura uniforme e il buon effetto, mentre i suoi svantaggi sono il lento processo di riscaldamento. Durante il riscaldamento, non è consentito riscaldarsi prima di soffiare, ma il soffiaggio e il riscaldamento dovrebbero iniziare contemporaneamente. Quando la temperatura raggiunge i 100 ℃, il soffiaggio deve essere interrotto. Prestare attenzione per evitare di bruciare la carta o il cotone che avvolge gli utensili. I detriti bruciati possono influenzare la crescita delle cellule. Dopo la disinfezione, lo sportello della scatola non può essere aperto immediatamente per evitare la rottura della vetreria dovuta al raffreddamento improvviso.




5. Dispositivo di purificazione dell'acqua




La qualità dell'acqua per la coltura cellulare è elevata. L'acqua per la preparazione della coltura cellulare, il liquido relativo alla coltura cellulare e l'acqua per la pulizia degli utensili per la coltura cellulare devono essere rigorosamente purificati in anticipo. Attualmente, ci sono una varietà di metodi di purificazione combinati per rendere l'uso di dispositivi per acqua pura in grado di purificare l'acqua ordinaria in acqua pura e acqua ultrapura molto flessibile e conveniente. Possono essere montati a parete, desktop, dotati di serbatoi di accumulo dell'acqua o utilizzati direttamente con una pistola per la separazione dei liquidi. Possono anche essere configurati con funzioni di sterilizzazione in base alle esigenze di vari tipi di acqua sperimentale, rimuovendo efficacemente enzimi DNA, enzimi RNA, proteasi, ecc., nonché dispositivi di ultrafiltrazione per acqua pura in grado di rimuovere efficacemente fonti di calore ed endotossine.




6. Frigorifero




L'attrezzatura necessaria del laboratorio di coltura cellulare deve essere dedicata e non deve immagazzinare sostanze volatili, infiammabili e altre sostanze dannose per le cellule e deve essere mantenuta pulita. In genere, include frigoriferi ordinari, frigoriferi a bassa temperatura e frigoriferi a bassissima temperatura.




Frigorifero ordinario: può conservare liquido di coltura, soluzione salina normale, reagente liquido Hanks e altri articoli di coltura e può conservare campioni di tessuto per un breve periodo.




-20 ℃ frigorifero a bassa temperatura e frigorifero a bassissima temperatura: utilizzato per conservare preparazioni che devono essere congelate per mantenere l'attività biologica e devono essere conservate a lungo, come enzimi, siero, ecc.




7. Criostato cellulare




I contenitori di azoto liquido comunemente utilizzati in giacimento possono essere suddivisi in diverse tipologie e specifiche a seconda delle esigenze di utilizzo. È necessario considerare tre fattori quando si seleziona un contenitore di azoto liquido: dimensione del volume, facile accesso e utilizzo e volatilizzazione dell'azoto liquido. La dimensione del contenitore di azoto liquido è generalmente di 25-500 l, che può contenere circa 250-15000 criotubi da 1 ml. La temperatura più bassa dell'azoto liquido può raggiungere - 196 ℃, quindi prestare attenzione per evitare il congelamento durante l'uso. Poiché l'azoto liquido è volatile, è necessario osservare la quantità di azoto liquido rimanente e integrarlo in tempo per evitare danni cellulari o morte a causa di azoto liquido insufficiente. Al momento, ci sono molti contenitori intelligenti per la crioconservazione cellulare tra cui scegliere. I contenitori di azoto liquido dotati di controllori elettronici possono realizzare la crioconservazione automatica; Il livello di azoto liquido e la temperatura del campione possono essere monitorati per garantire che la temperatura del campione sia sempre al punto di temperatura impostato; Il sistema di allarme può essere configurato per l'allarme in caso di livello di azoto liquido, temperatura, batteria, voltaggio, alimentazione e altre anomalie; Allo stesso tempo, viene fornito un sistema di bypass del gas caldo per impedire che aria calda superiore a - 130 ℃ entri nel serbatoio di azoto liquido, in modo da proteggere il campione in modo più efficace e prevenire l'aumento della temperatura nel contenitore. Inoltre, il serbatoio di alimentazione dell'azoto liquido può essere selezionato per integrare l'azoto liquido nel serbatoio di stoccaggio attraverso il tubo di collegamento per garantire la sicurezza del campione. Il livello di azoto liquido e la temperatura del campione possono essere monitorati per garantire che la temperatura del campione sia sempre al punto di temperatura impostato; Il sistema di allarme può essere configurato per l'allarme in caso di livello di azoto liquido, temperatura, batteria, voltaggio, alimentazione e altre anomalie; Allo stesso tempo, viene fornito un sistema di bypass del gas caldo per impedire che aria calda superiore a - 130 ℃ entri nel serbatoio di azoto liquido, in modo da proteggere il campione in modo più efficace e prevenire l'aumento della temperatura nel contenitore. Inoltre, il serbatoio di alimentazione dell'azoto liquido può essere selezionato per integrare l'azoto liquido nel serbatoio di stoccaggio attraverso il tubo di collegamento per garantire la sicurezza del campione. Il livello di azoto liquido e la temperatura del campione possono essere monitorati per garantire che la temperatura del campione sia sempre al punto di temperatura impostato; Il sistema di allarme può essere configurato per l'allarme in caso di livello di azoto liquido, temperatura, batteria, voltaggio, alimentazione e altre anomalie; Allo stesso tempo, viene fornito un sistema di bypass del gas caldo per impedire che aria calda superiore a - 130 ℃ entri nel serbatoio di azoto liquido, in modo da proteggere il campione in modo più efficace e prevenire l'aumento della temperatura nel contenitore. Inoltre, il serbatoio di alimentazione dell'azoto liquido può essere selezionato per integrare l'azoto liquido nel serbatoio di stoccaggio attraverso il tubo di collegamento per garantire la sicurezza del campione. Il sistema di allarme può essere configurato per l'allarme in caso di livello di azoto liquido, temperatura, batteria, voltaggio, alimentazione e altre anomalie; Allo stesso tempo, viene fornito un sistema di bypass del gas caldo per impedire che aria calda superiore a - 130 ℃ entri nel serbatoio di azoto liquido, in modo da proteggere il campione in modo più efficace e prevenire l'aumento della temperatura nel contenitore. Inoltre, il serbatoio di alimentazione dell'azoto liquido può essere selezionato per integrare l'azoto liquido nel serbatoio di stoccaggio attraverso il tubo di collegamento per garantire la sicurezza del campione. Il sistema di allarme può essere configurato per l'allarme in caso di livello di azoto liquido, temperatura, batteria, voltaggio, alimentazione e altre anomalie; Allo stesso tempo, viene fornito un sistema di bypass del gas caldo per impedire che aria calda superiore a - 130 ℃ entri nel serbatoio di azoto liquido, in modo da proteggere il campione in modo più efficace e prevenire l'aumento della temperatura nel contenitore. Inoltre, il serbatoio di alimentazione dell'azoto liquido può essere selezionato per integrare l'azoto liquido nel serbatoio di stoccaggio attraverso il tubo di collegamento per garantire la sicurezza del campione.




8. Centrifuga




Nella coltura cellulare, la centrifugazione viene solitamente utilizzata per preparare la sospensione cellulare, regolare la densità cellulare, lavare e raccogliere le cellule. La centrifuga da tavolo da 4000 giri/min è generalmente configurata; Per eseguire la sedimentazione cellulare, è necessaria una forza centrifuga di 80-100 G, poiché una forza centrifuga eccessiva danneggerà le cellule. In base alle diverse esigenze, sono disponibili centrifughe di grande capacità, a temperatura regolabile, centrifughe ad alta velocità, centrifughe di congelamento a bassa temperatura e altre centrifughe più funzionali tra cui scegliere.




9. Equilibrio




Le bilance di precisione e le bilance analitiche sono comunemente usate. La precisione della bilancia analitica è generalmente di 0,1 mg, 0,01 mg e 0,001 mg. Generalmente, una bilancia adatta viene scelta in base al volume di campionamento e ai requisiti di precisione: una bilancia con un'accuratezza di 0,1 mg dovrebbe essere selezionata quando il volume di campionamento è maggiore di 100 mg; La quantità di campionamento è 100-10 mg e viene selezionata una bilancia con una precisione di 0,01 mg; Per un volume di campionamento di 10 mg deve essere selezionata una bilancia con una precisione di 0,001 mg. La bilancia deve essere calibrata regolarmente. La bilancia con funzione di calibrazione automatica può essere selezionata per una facile manutenzione. Quando si utilizza la bilancia, prestare attenzione alla pulizia ed evitare che polvere e liquidi corrosivi vengano a contatto diretto con la piattaforma di pesata.


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