Fattori ambientali della coltura cellulare
Fattori ambientali della coltura cellulare
1. Ambiente sterile
Non tossicità e sterilità sono le condizioni primarie per la coltura cellulare in vitro. In vivo, il sistema di disintossicazione e il sistema immunitario delle cellule possono resistere all'invasione di microrganismi o altre sostanze nocive. Tuttavia, nel processo di coltura in vitro, le cellule non hanno la protezione del sistema immunitario del corpo e perdono la capacità di difendere i microrganismi e disintossicare le sostanze nocive. Per garantire che le cellule possano crescere e riprodursi in vitro, è necessario garantire aree di lavoro sterili, una buona igiene personale, reagenti e terreni di coltura sterili e operazioni sterili.
L'inquinamento microbico comune include micoplasmi, batteri e funghi. Il micoplasma non ha tossicità letale, può coesistere con le cellule per lungo tempo e ha potenziali effetti sulle cellule. Tuttavia, è piccolo e difficile da identificare. Può essere rilevato dalla colorazione rosso lichene o hoechst33342. I batteri proliferano rapidamente e possono espandersi in grande quantità in breve tempo e produrre tossine per uccidere le cellule. Ci sono molti tipi di funghi, che possono essere visti ad occhio nudo. Galleggiano sulla superficie del liquido di coltura e possono essere filamentosi, tubolari o dendritici.
2. Temperatura adeguata
In generale, la temperatura adatta per le cellule di mammiferi e uccelli da coltivare in vitro è 37-38 ℃ e la temperatura ambientale inappropriata influenzerà la crescita delle cellule. La tolleranza della cellula alle basse temperature è maggiore di quella alle alte temperature. A bassa temperatura, l'attività metabolica della cellula e la capacità di divisione nucleare diminuiscono. Se la temperatura non è inferiore a 0 ℃, il metabolismo cellulare ne risente, ma non ci sono danni; A 25 ~ 35 ℃, le cellule sono cresciute lentamente; Tuttavia, se viene posizionato a 40 ℃ per diverse ore, non favorisce la sopravvivenza e la crescita delle cellule e può persino portare alla loro morte.
3. Idonea pressione osmotica
Una soluzione ipertonica o una soluzione ipotonica può causare la formazione di rughe, gonfiore e rottura delle cellule. Pertanto, la pressione osmotica è una delle condizioni importanti per la coltura cellulare in vitro. La maggior parte delle cellule coltivate in vitro hanno una certa tolleranza alla pressione osmotica. Nell'applicazione pratica, la pressione osmotica di 260-320 mmol/l può essere applicata alla maggior parte delle cellule.
4. Ambiente gassoso e pH
La coltura in vitro delle cellule richiede un ambiente gassoso ideale e l'ossigeno e l'anidride carbonica sono le condizioni necessarie per la sopravvivenza cellulare. L'ossigeno partecipa al ciclo dell'acido tricarbossilico delle cellule e fornisce energia per la sopravvivenza, il metabolismo e la sintesi cellulare; L'anidride carbonica non è solo un prodotto metabolico delle cellule, ma anche un componente essenziale della crescita cellulare ed è anche correlata al mantenimento del pH del mezzo di coltura. L'intervallo di pH adatto per la maggior parte delle cellule è solitamente 7,2-7,4. Nella cultura aperta, il 5% di anidride carbonica era il migliore.