Qual è il tipo di mezzo di coltura cellulare e come utilizzarlo?
La coltura cellulare animale consiste nel prelevare tessuti rilevanti dal corpo animale, disperderli nelle singole cellule (usando tripsina o collagenasi) e quindi metterli in un mezzo di coltura adatto per consentire a queste cellule di crescere e proliferare.
Quali sono i tipi di terreni di coltura cellulare?
In base alla storia di sviluppo dei terreni di coltura cellulare, i terreni di coltura cellulare possono essere suddivisi approssimativamente in diversi tipi, come soluzioni saline bilanciate, terreni di coltura cellulare naturali, terreni di coltura cellulare sintetici, terreni di coltura cellulare privi di siero e terreni di coltura cellulare con componenti chimici.
1. Mezzo di coltura cellulare DMEM
DMEM (mezzo essenziale minimo modificato di Dulbecco) è ottenuto da Dulbecco sulla base del mezzo MEM. La quantità di ogni componente viene raddoppiata e divisa in due tipologie: a basso contenuto di zucchero (1000 mg/L) e ad alto contenuto di zucchero (4500 mg/L). Le cellule crescono velocemente. È meglio usare un alto contenuto di glucosio per coltivare cellule tumorali con scarsa adesione e cloni, ed è spesso usato per coltivare cellule di mieloma di ibridoma e cellule trasformate trasfettate con DNA.
2. Mezzo di coltura di base neuronale
Può fornire nutrienti di base per la crescita dei neuroni.
3. Mezzo per insetti Ipl-41
Il mezzo per insetti Ipl-41 è progettato per l'espansione su larga scala della linea cellulare di Spodoptera frugiperda ed è anche comunemente usato per l'espressione proteica da parte del sistema di espressione del baculovirus (BEVS). Ipl-41 medium è un miglioramento rispetto alla formula IPL originale. È stato sviluppato da Weiss et al. Del laboratorio di patologia degli insetti del Dipartimento dell'agricoltura degli Stati Uniti. È stato utilizzato per l'espansione su larga scala di linee cellulari derivate da Spodoptera meadowensis. Weiss ha aggiunto siero bovino fetale e mezzo TPB al mezzo di base e ha realizzato con successo la coltura continua su larga scala della linea cellulare ipl-21 AE (III).
Il mezzo viene utilizzato principalmente per la coltura e il mantenimento di linee cellulari derivate da lepidotteri e per l'amplificazione dei virus di queste linee cellulari. Il mezzo Ipl-41 è stato utilizzato anche per esprimere la proteina ricombinante del baculovirus in cellule di Spodoptera prive di siero.
1.1 soluzione salina bilanciata (BSS)
Il BSS è composto principalmente da sali inorganici e glucosio. La sua funzione è di mantenere l'equilibrio della pressione osmotica delle cellule, mantenere la stabilità del pH e fornire un'alimentazione semplice. Viene utilizzato principalmente per il risciacquo delle cellule e la preparazione di altri reagenti.
Attualmente, il siero utilizzato per la coltura cellulare è principalmente siero bovino e alcune cellule speciali vengono anche coltivate con siero umano e siero di cavallo. Il siero bovino è adatto per la maggior parte delle cellule di mammiferi, ma non è escluso che sia più adatto l'uso di altri sieri animali durante la coltura di determinate cellule. Il siero contiene varie proteine plasmatiche, polipeptidi, grassi, carboidrati, fattori di crescita, ormoni, sostanze inorganiche, ecc. queste sostanze raggiungono l'equilibrio fisiologico favorendo la crescita cellulare o inibendo l'attività di crescita.
1.2 terreno di coltura cellulare sintetico
Il mezzo di coltura sintetico è un tipo di mezzo di coltura sintetizzato, progettato artificialmente e preparato con sostanze chimiche in base alla composizione del mezzo di coltura naturale. Il primo mezzo di base sviluppato (MEM) è essenzialmente una miscela isotonica tamponata con pH contenente sale, aminoacidi, vitamine e altri nutrienti essenziali. Su questa base, sono stati continuamente sviluppati DMEM, IMDM, prosciutto F12, prmi1640 e altri mezzi di coltura cellulare sintetici.