Precauzioni per la coltura cellulare
Precauzioni per la coltura cellulare
(1) Quando si coltiva una determinata cellula per la prima volta, è necessario prima cercare il nome della cellula per comprendere le informazioni rilevanti, inclusi il mezzo di coltura, siero, additivi, tempo di digestione normale, tempo di passaggio, ecc. Per cellule specifiche (come come cellule coltivate primarie), è necessario consultare la letteratura pertinente per ottenere metodi di coltura più accurati.
(2) Quando si entra nella coltura da cellula a cellula, è necessario seguire rigorosamente i seguenti passaggi:
① Assicurarsi che tutte le soluzioni e i materiali di consumo per il funzionamento della cella siano stati disinfettati e testati senza problemi. Non utilizzare soluzioni e materiali di consumo incerti. Non prendere in prestito soluzioni di altre persone se non in circostanze speciali.
② Assicurati che i polsini dei vestiti siano arrotolati o che i polsini del camice bianco siano allacciati.
③ Determinare la quantità di alcol nella lampada dell'alcol e rabboccarla se necessario.
④ Assicurarsi che tutte le soluzioni e i materiali di consumo necessari siano a portata di mano. Per aprire il tappo di bottiglia con una mano, tutti i tappi di bottiglia possono essere allentati prima dell'esperimento.
⑤ Cerca di non versare la soluzione direttamente a meno che la bocca della bottiglia non sia bruciata. Se il versamento non riesce e la soluzione si attacca alla bocca della bottiglia, pulire accuratamente la periferia della bocca della bottiglia con un tovagliolo di carta spruzzato con alcol al 75% (non toccare la bocca della bottiglia) e bruciarlo sul fiamma.
⑥ Se i materiali di consumo utilizzati non sono sicuri di essere puliti durante il funzionamento, devono essere sostituiti in tempo.
⑦ Pulisci in tempo dopo l'esperimento, mantieni l'area di lavoro pulita e ordinata e infine pulisci il tavolo con alcol al 75%.
(3) Prevenzione della contaminazione cellulare
① Le forniture di laboratorio prevengono l'inquinamento. I reagenti, i materiali di consumo e le attrezzature utilizzati per la coltura cellulare devono essere accuratamente puliti e disinfettati e la sterilizzazione delle varie soluzioni deve essere attenta e può essere utilizzata solo dopo che il test di sterilità è negativo. La sala operatoria e le restanti apparecchiature sterili devono essere pulite, disinfettate e sterilizzate regolarmente.
② Prevenire l'inquinamento durante il funzionamento.
③ Gli indumenti che sono facili da generare elettricità statica o assorbire la polvere devono essere sostituiti con camici bianchi prima di entrare nelle celle.
④ Prima dell'inizio dell'esperimento, è necessario assicurarsi che non ci siano problemi con i guanti. Finché i guanti sono a contatto con oggetti al di fuori dell'armadio di biosicurezza, i guanti devono essere disinfettati in tempo.
⑤ Dopo essere entrati nella stanza della coltura cellulare, chiudere la porta, sedersi e camminare il meno possibile per evitare di danneggiare la cortina d'aria dell'armadio di biosicurezza. Pulisci le mani e i tappi di bottiglia con batuffoli di cotone al 75% di alcol prima del lavoro. Controllare scrupolosamente in anticipo le apparecchiature, le soluzioni e le celle utilizzate. Non portare nella stanza sterile articoli contaminati o non sterilizzati, tanto meno usarli con disinvoltura, in modo da evitare un inquinamento su larga scala.
⑥ Il funzionamento delle celle dovrebbe essere leggero. La bocca della bottiglia deve essere aperta nell'area sterile attorno alla fiamma e la bocca della bottiglia deve essere posizionata attorno alla fiamma per una semplice rotazione e combustione. Fare attenzione a non lasciare che la fiamma bruci la bocca della bottiglia di plastica.
⑦ Durante l'operazione sperimentale, la partizione dell'armadio di biosicurezza dovrebbe essere il più basso possibile per ridurre al minimo la conversazione. Quando si starnutisce o si tossisce, non deve essere rivolto verso l'area di lavoro per evitare un inutile inquinamento.
⑧ Il tappo della bottiglia deve essere posizionato capovolto lontano da se stesso per evitare che il tappo della bottiglia venga inquinato da un funzionamento errato.
⑨ Non passare sopra il contenitore aperto per evitare la contaminazione cellulare causata da oggetti sconosciuti che cadono sui vestiti.
⑩ Durante l'operazione sperimentale, prestare attenzione alla sostituzione tempestiva della pipetta Pasteur, della testina e della pipetta e non eseguire un tubo fino alla fine. In caso di contatto con articoli sporchi o indeterminati, questi devono essere direttamente scartati. Dopo l'esperimento, deve essere pulito in tempo per mantenere il laboratorio pulito e ordinato. Infine, il piano del tavolo deve essere pulito con alcol al 75%.
(4) Prevenire la contaminazione incrociata delle cellule
① Quando si eseguono varie operazioni di coltura cellulare, gli strumenti utilizzati devono essere rigorosamente distinti ed è meglio contrassegnarli per l'identificazione. L'operazione viene eseguita in sequenza e viene elaborata solo una cella alla volta. Quando più celle e più operazioni vengono eseguite insieme, è probabile che si verifichi confusione.
② Durante l'operazione di scambio o passaggio del liquido, la testa della pipetta e la pipetta attaccata alle cellule non devono toccare l'imboccatura del flacone del reagente, in modo da evitare di portare le cellule nel mezzo di coltura e di inquinare altre cellule.
③ Una volta che tutte le cellule sono state acquistate, introdotte da altri luoghi o stabilite da sole, devono essere conservate e congelate nel tempo. In caso di inquinamento, le cellule possono essere rianimate e continuare a essere coltivate.